1. OD600 的物理本質是什么？

OD600（Optical Density 600 nm）測量的并不是吸光本身，而是微生物細胞在 600 nm 波長下對光的散射效應。
原因：細菌在可見光區域幾乎不吸光，主要產生米氏散射，因此 OD600 實際反映的是“濁度"。

2. 為什么選擇 600 nm？

600 nm 波長具有以下優勢：

• 微生物細胞對該波長幾乎無吸收

• 散射信號穩定、線性范圍寬

• 避免色素、培養基顏色帶來的干擾

因此，600 nm 是微生物實驗中幾乎統一的國際標準。

3. OD600 與細胞濃度的關系

OD600 通常用來估算細胞密度（CFU/mL），其關系可用線性擬合或經驗公式表示：

$$\text{CFU/mL}=k\times \text{OD600}$$CFU/mL=k×OD600

不同菌種、培養基、儀器均會影響系數 k，因此需要每個實驗室自行建立標準曲線。

4. OD600 測量的常見誤差來源

5. 如何獲得穩定可靠的 OD600？

• 使用統一光路的專業 OD600 儀（如固定 600 nm 波長、固定光程）

• 測量前充分 vortex 混勻

• 比色皿保持清潔透明

• 使用同型號試管或比色皿

• 測量高濃度時進行 1:10 或 1:20 稀釋

若使用如 Implen OD600® 這類固定光路設備，可顯著降低試管差異導致的誤差。

6. 總結

OD600 雖然簡單，卻是微生物實驗最重要的基礎數據。正確理解其原理、限制以及誤差來源，有助于提升實驗的可靠性，也能為后續的蛋白表達、發酵監控、代謝研究提供更準確的數據支撐。